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              總結分享一些關于多肽合成的一些問題
              點擊次數:170 發布時間:2023-02-08
                多肽固相合成法是多肽合成化學的一個重大的突破。它的最大特點是不必純化中間產物,合成過程可以連續進行,進而為多肽合成的自動化奠定了基礎。目前全自動多肽的合成,基本都是固相合成。其基本過程如下:
               
                基于Fmoc化學合成,先將所要合成的目標多肽的C-端氨基酸的羧基以共價鍵形式與一個不溶性的高分子樹脂相連,然后以這一氨基酸的氨基作為多肽合成的起點,同其它的氨基酸已經活化的羧基作用形成肽鍵,不斷重復這一過程,即可得到多肽。根據多肽的氨基酸組成不同,多肽后處理方式不同,純化方式也有差異。
               
                那么關于多肽合成是的一些問題,下面為大家總結了一些一起來看看吧。
               
                1.做免疫用的多肽多長為合適?
               
                一般約10-15個氨基酸,當然長一些免疫效果好一些,不過合成費用也會增加。MAP多肽則希望長度在15aa以上,效果較好。另外,10aa以下的多肽免疫效果比較差。
               
                2.免疫用多肽的純度需要很高嗎?
               
                一般而言,免疫用Peptide,70-85%即可。
               
                3.我們合成的多肽溶解性不好,多肽就有問題對嗎?
               
                很難準確預測一個多肽的溶解性及合適的溶劑是什么。如果多肽難以溶解就認為多肽合成有問題這個觀念并不正確。
               
                4.多肽狀態是如何?如何保存儲存?
               
                我們提供的多肽是粉末狀,一般為灰白色,組成不同,多肽粉末的顏色有差異,多肽一般長期保存需要避光保存,并應保存在-20度,短期可以保存在4度??梢远虝r間的話是以室溫運輸。
               
                5.如何溶解多肽
               
                溶解多肽是非常復雜的事情,一般很難一下子確定合適的溶劑。通常是先取一點試驗,在沒有確定合適的溶劑前千萬不要合部溶解。 下列方法有助于您選擇合適的溶劑:
               
                (1)判定多肽的電荷特定,設定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH為-1;堿性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2為+1,其它氨基酸的電荷為0。計算出將電荷數。
               
                (2)如果凈電荷數>0,多肽為堿性,用水溶解:如果不溶解或溶解性不大,加入醋酸(10%以上);如果多肽還不能溶解,加入少量TFA(25ul)溶解,然后加入500ul水稀釋。
               
                (3)如果凈電荷數<0,多肽為酸性,用水溶解;如果不溶解或溶解性不大,加入氨水(25ul)溶解,然后加入500ul水稀釋。
               
                (4)如果凈電荷數=0,多肽為中性,一般需要用有機溶劑如乙腈,甲醇或異丙醇,DMSO等溶解。還有人建議需要尿素來溶解疏水性很大的多肽。
               
                6.非HPLC純化的多肽中有哪些雜質?
               
                粗品和脫鹽級別的多肽中多肽和非多肽類雜質:如非全長多肽和多肽后處理的一些原料如DTT、TFA等。

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